A kadherin komplex sejt adhéziójának molekuláinak expressziója és szerepe a
A KOMPLEX CELL ADHEZIÓS MOLEKULÁSAINAK MEGHATÁROZÁSA ÉS A SZEREPE A DIAGNOSZTIKÁBÓL AUTOMATIKUS HIBÁK DERMATÓZISOKBAN
Makhneva N.V. 1 Beletskaya L.V. 2
1 Állami Intézet Moszkvai Regionális Tudományos és Klinikai Kutatóintézet. MF Vladimirsky, Moszkva
2 FGU "Szövetségi Tudományos Központ a Transzplantáció és a Mesterséges Org. ak. VI Shumakov »Oroszországi Egészségügyi és Szociális Fejlesztési Minisztérium, Moszkva
A kadherinek a kalciumfüggő glikozilezett fehérjék sokszínű csoportja. Ezeknek a molekuláknak az expressziója vagy diszfunkcionális rendellenessége súlyos pusztító következményekhez vezet. Az autoimmun bulilus dermatózisokban a kadherinkomplex expressziós szintjének megsértését észlelték a normális lokalizáció és a perverz expresszió megjelenése az epidermisz bazális membránjának régiójában. A kadherinek expressziójában és lokalizációjában mutatkozó változások azt mutatják, hogy az etiológiai és patogenetikai tényezők hatására az egyik gén funkciója más génekre kapcsolódik, azaz amikor elfojtják és aktiválják másokat. A kapott információ további diagnosztikai markerekként használható az autoimmun bulilus dermatózusok differenciáldiagnózisában.
közvetett immunfluoreszcencia módszerrel
autoimmun bullous bőrgyulladás
3. A desmokollin 1-et nem tartalmazó egerek epidermális sérülékenységet mutatnak, amelyhez mellékhatások és rendellenes differenciálódás lép fel,
M. Chidgey, C. Brakebusch, E. Gustafsson, A. Cruchley, C. Haill, S. Kirk, A. Mernitt, A. North, C. Tselepis, J. Hewitt //
A cadherinek a kalcium-függő glikozilezett fehérjék legkülönbözőbb csoportját képviselik. Főként intercelluláris interakciókat alkalmaznak, így két azonos molekula közötti tapadást biztosítanak, amelyek ugyanazon típusú két sejt felszínén expresszálódnak [2, 5]. Ezeknek a molekuláknak a citoplazmatikus doménje fontos szerepet játszik a citoszkeleton fehérjékkel összefüggésben, hozzájárulva a sejtek alakjának megőrzéséhez [6]. A két sejt közötti cadherin által biztosított fizikai érintkezés mellett számos jelet továbbítanak a citoszkeleton szerkezetén keresztül, szabályozva a sejtek növekedését és differenciálódását [5]. A bőrön az adhéziós molekulák komplex szervezést biztosítanak a hám, a dermis, az edények, az idegek, a mirigyek tekintetében. És az ezeknek a molekuláknak az expressziójának vagy diszfunkciójának anomáliájával kapcsolatos változások súlyos pusztító következményekhez vezethetnek [2, 3, 9].
A vizsgálat célja az volt, hogy meghatározzuk a kadherin komplex expressziójának mértékét az autoimmun bulilus dermatózisokban és annak lehetőségét, hogy a kapott adatokat kiegészítő diagnosztikai markerként használjuk fel ezeknek a betegségeknek.
Anyag és vizsgálati módszerek
A munkát egy klinikai vizsgálat és az autoimmun bulilus dermatózisos betegek bőrének biopsziás anyagának tanulmányozása alapján végeztük.
Tanulmány a mértékét cadherin összetett kifejezés által végzett indirekt immunfluoreszcenciával monoklonális antitestek (MAb) egér anti-cadherin komplex, anti-pan cadherin (SIGMA, USA) 47 biopsziák klinikailag ép bőrön és biopszia az érintett területek 45 betegen, akik közül 23 beteg autoimmun pemphigus (pemphigus vulgáris 11 beteg, 9 - seborrheás pemphigus, pemphigus vegetans egy beteg, egy - pemphigus levél-on - praneoplasticheskoy pemphigus), 16 beteg bullosus pemphigoid, 2 - lineáris IgA-függő hólyagos dermatózis, 4 - szerzett epidermolysis bullosa. A kontroll fagyasztott metszeteken különböző típusú szövetek. Szelet a bőr egészséges egyének, betegek tágult szívizombetegség, humán vese szeletekre szelet marhahús szív. Ebben a komplex expressziójának cadherin detektáltunk az intercelluláris terek a bazális és a spinális rétegek az epidermisz (a) ábra, a szőrtüsző a bőrben arteriolák fala, lépésbetét lemezek szívizomsejtek a sejt-sejt érintkezési felületet a vesetubulusok és glomerulusok.
Helyi érzéstelenítés alatt 2,0% -os oldatával novocain hajtjuk bőrbiopsziával (a klinikailag érintett és nem érintett területek) méretezve 0,5 × 0,5 cm. Szövetdarabot lefagyasztottuk -20 ° C-on Kriosztát metszeteket 4-5 mikrométer vastagságú állítottuk elő mikrotom fagyasztóból (-20 ° C), és használjuk egy meghatározott formában (100% th hideg (4 ° C) acetonnal 10 perc). A metszeteket ezután foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS), pH = 7,0-7,4, 3-5 percig mossuk. Amikor MKAT-t alkalmaztunk szakaszokra, a készítményeket 18 órán át 4 ° C-on tartottuk nedves kamrában. Öblítés után 3-5 percig PBS-sel (pH = 7,0-7,4) lumineszcens metszeteket kezelt szérumot elleni egér immunglobulin ((Institute of Epidemiology és Mikrobiológiai, Orosz Orvostudományi Akadémia N.G.Gamalei ;. IMTEK, Moszkva) a 50- 60 percig egy nedves kamrába termosztátban 37,0-37,2 ° C-on, ismét mossuk PBS-sel 3-5 percig, és arra a következtetésre jutott a fedőlemez egy 60% semleges glicerin. gyógyszereket vizsgáltuk fluoreszcens mikroszkóppal LEITZ LABORLUX S (LEIKA) Az előkészületeket x40-es lencse és okulár-homál x3-at tartalmazó RF-3 filmen fényképeztük.
Rész szeleteket használják a nem-rögzített formában, hogy érzékeli a rögzített immunglobulin az intercelluláris terek és az övezetben a bazális membrán epidermisz autoimmun pemphigus és autoimmun hólyagos dermatózisok elváltozások a dermo-epidermális kapcsolatban (bullózus pemphigoid, lineáris IgA-függő hólyagos dermatózis, szerzett epidermolysis bullosa) rendre. Kriosztát metszeteket, rögzített 96 ° etanolban, megfestettük hematoxilinnel és eozinnal céljából morfológiai kontroll.
A tanulmány eredményei és vitájuk
Abban a vizsgálatban, mint klinikailag ép és az érintett bőrt 23 különböző formáiban szenvedő betegek a pemphigus talált sérti a kifejezés a cadherin bonyolult. Így, mind a 11 vizsgált esetekben pemphigus vulgáris, valamint területek normális cadherin expresszió közötti terekben, ezek kiderült eltűnése ez a lokalizáció a maszkolási vagy egyidejű expresszióját cadherin-pozitív anyagot a stratum corneum és / vagy a bőr felületén (b ábra). Ezen túlmenően, az 5 esetben járulékosan észlelt peritsitoplazmaticheskaya vagy perinukleáris expresszió különböző sejtes elemek a bazális és a spinális rétegek egyidejű reakciózónában a bazális membrán a felhám. Immunogistohimichskuyu hasonló képet volt megfigyelhető abban az esetben, vegetál (1) és a paraneoplasztikus (1) a pemphigus. Ha abban az esetben, vegetál pemphigus jelölt csak perinukleáris cadherin expresszió különféle celluláris elemeket, abban az esetben, paraneoplasztikus pemphigus - további oldalak és a területen a bazális membrán a felhám. Ezenkívül mindkét esetben a megfigyelt felhalmozódása cadherin-pozitív anyagot a szaruréteget és megkötésében, hogy a bőr felszínén.
Érdekes módon a cadherin-komplex vulgáris pemfigusz-expresszióját főként (11-ből 11 esetben) az epidermis bazális és fonákos rétegeinek intercelluláris térben vették észre. Ugyanakkor a lumineszcencia intenzitása az immunhisztokémiai reakcióban különbözött a kadherin komplex expresszált expressziójától a teljes hiányától az olyan helyeken, ahol az intraepidermális húgyhólyag kezdett kialakulni. Abban az esetben, amikor intraepidermális orr basalis buborék képződik, paradoxon jelenséget fedeztek fel: a kadherin expressziójának növekedése a húgyhólyag borítója feletti suprabasális rétegekben.
Mind a kilenc vizsgált esetekben a seborrhoeás pemphigus klinikailag ép területeken, valamint a bőr elváltozásainak kiderült, hogy világos képet zavara kifejezése cadherin: ezek egy másik expressziós szintet az intercelluláris terek a bazális és a spinális rétegek teljes eltűnéséig a felhalmozódása egy adott anyag a stratum corneum és megkötésében annak a felületen a bőr. Azon a helyen, kialakulásának intraepidermális vezikulum, mint abban az esetben a pemphigus vulgáris, jelölt expressziója cadherin kifejezve a szuprabazális réteg az epidermisz, a gumiabroncsösszetevőelemet. Ezen túlmenően, az 5 esetből 9 járulékosan detektált perinukleáris expresszió különféle celluláris elemeket, és a 3 más esetben - a régióban a bazális membrán a felhám.
Azokon a területeken, képző intraepidermális buborékokat figyeltek elvesztése az intercelluláris kapcsolatok hosszabb szakaszok az epidermisz, annak minden réteg és a kialakulását mind nadbazalnyh (mély) és a felület (szinten a szemcsés réteg) intraepidermális buborékok. Érdekes, ugyanabban a betegben időben lehet megfigyelni a buborékképződés különböző szinteken a rétegek a felhám. Az amplifikációs cadherin expresszió volt kimutatható a citoplazmában a keratinociták a felső réteg a felhám, és néhány esetben (3 esetben) mind részei a régióban a bazális membrán a felhám.
Egyidejű vizsgálata érintetlen és klinikailag érintett területek két seborrheás pemphigus betegek feltárta egy azonos mintát immunmorfológiai - Komplex gyengülése cadherin felületén a bazális és a spinális rétegek peritsitoplazmaticheskoy vagy perinukleáris expresszióját az egyes sejtekben és sejt elelementah megkötés az adott anyag, hogy a bőr felületén. Sőt, az egyik esetben kiderült expresszió epidermális bazális membrán.
Abban az esetben, pemphigus levél említett eltűnése cadherin adhéziós molekula expresszióját a széles területeken az epidermisz, annak ellenére, hogy morfológiai patológiájában klasszikus lokalizációs felületes intraepidermális hólyag erős expresszióját az ott cadherin komplex.
A tanulmány a fagyasztott metszeteken a bőr betegek pemphigusszerű mind a 16 vizsgált esetek azt mutatták csökkent kifejeződését cadherin bonyolult. Így, a legtöbb esetben (14 16), valamint a részek védelmi cadherin a sejtek felületén a felhám feltárt eltűnésével vagy maszkírozó adhéziós molekulák expresszióját, hogy a kifejezést a zónában a bazális membrán az epidermisz és a perinukleáris területen egyes sejt elemek zsúfolt kadgerin- pozitív anyag alatt horny réteg és a bőr felszínére való megkötés. Expressziója cadherin komplex területén a bazális membrán a felhám megfigyelt 10 esetből 14, és a helyén képződési szubepidermális buborék is - annak fedél és az alsó. A leghangsúlyosabb kifejeződést a szubepidermális hólyag burkolatán figyelték meg (c. Ábra). Két esetben, hólyagos pemphigoid cadherin komplex expressziót nem észleltünk semmilyen az epidermális struktúrák.
Cadherin komplex expressziója. Monoklonális antitestekkel történő kezelés
a pán-cadherinhez. Közvetett immunfluoreszcencia módszer. X400:
egy - gyakorlatilag egészséges személy - kriosztátos szakasza. A cadherin komplex expressziója az epidermisz intercelluláris terének (nyíl) desmoszómáiban; b - e: autoimmun bullous dermatosisban szenvedő betegek klinikailag érintetlen bőrfelületének kriosztát szakaszai. Sok normális cadherin expresszió visszaszorítása tarkított régiók (nyíl) expresszióját dezmoszómák az intercelluláris terek autoimmun pemphigus (b); c - bulilus pemphigoid. Expresszált cadherin expresszió a subepidermal hólyag sapkáján (nyíl); g - lineáris IgA-függő bulális dermatózis. Reakció az epidermisz alsó membránjának (nyíl) régiójában egy adott anyag megkötésével
a bőr felületén; d - szerzett bulius epidermolysis. Kimondva reaction
a subepidermális hólyag dermális részében (nyíl)
A két vizsgált esetekben, lineáris IgA-függő bullosus dermatosis jelölt perinukleáris adhéziós molekulák expresszióját bizonyos keratinocitákban és az epidermális bazális membrán zóna megkötés cadherin-pozitív anyagot a felületen a bőr (ábra g). Hasonló immunhisztokémiai képet figyeltek meg 4 esetben a megszerzett bulius epidermolysisben. Ebben az esetben az adhéziós molekulák expresszióját a dermo-epidermális vegyület laminálásának helyén epidermális és dermális részekben találjuk. A legnyilvánvalóbb immunhisztokémiai reakciót észlelték a subepidermális hólyag alján (e ábra).
Különböző tényezők, köztük autoantitestek hatására a cadherin intra- és extracelluláris doménjeinek disszociációja megtörténik. Ebben az esetben az extracelluláris domén cadherin levált a sejtfelszíni alatt acantholysisnek, de továbbra is a citoplazmatikus domén a membrán, tartani a kapcsolatot a citoszkeleton tartja össze catenin. Immunhisztokémiai vizsgálatok során ez a citoplazmatikus / intracelluláris kadherin domén elégséges ahhoz, hogy kötődjön az antitestekhez, ami pozitív reakciókat eredményez az atípusos lokalizációban.
Így ez a tanulmány nem csak lehetséges annak megállapítása, elkötelezettség cadherin komplex immunpatológiai folyamat autoimmun hólyagos dermatózisok, hanem azonosítani jellemzői az expressziójának ezekben a betegségekben. Az utóbbi lehet használni, mint egy további diagnosztikai markere a differenciál diagnosztikájában autoimmun hólyagos dermatózisok, különösen hólyagos pemphigus és a szerzett epidermolysis bullosa. Ez a diagnózis autoimmun hólyagos dermatosis a korai szakaszában a betegség lehetővé teszi a megfelelő terápia a csökkent kockázatával folyamatos mélyülése a kóros folyamat szenvedő betegeknél autoimmun hólyagos dermatosis.
Suskova V.S. MD professzor, fej. Immunodiagnosztikai Laboratórium és az FSI Immunororrection Laboratóriuma "FNCTIO im. akadémikus V.I. Shumakov "Oroszországi Egészségügyi és Szociális Fejlesztési Minisztérium, Moszkva;
Snarskaya E.S. MD Az első Moszkvai Állami Orvostudományi Egyetem Posztgraduális Szakképzési Karának Bőr- és Szexuális úton terjedő Betegségek Tanszékének professzora. IM Sechenov »Az Orosz Föderáció Egészségügyi és Szociális Fejlesztési Minisztériuma, Moszkva.
Figyeljük figyelmünket a "Természettudományi Akadémia" kiadójában megjelent folyóiratokra,
(A RINC nagy hatású tényezője, a folyóiratok tárgya minden tudományos területet lefedi)
Tudományos folyóirat ISSN 1812-7339 | ПИ №77-63397
Technikai ügyfélszolgálat - [email protected]
Bizenkov M.N. folyóirat ügyvezető titkára - [email protected]
A folyóirat anyagai a Creative Commons licenc "Attribution" 4.0 World alatt állnak rendelkezésre.