Munka 1
Munka 1. Tartalékfehérjék izolálása és tulajdonságaik tanulmányozása
Anyagok és berendezések. 1) borsó lisztet. oldat (NH 4) 2SO 4.
3) (NaCI) (száraz só), 4) koncentrált HNO 3 bedugaszolt cseppentő pipettával (tárolt elszívófülkében), 5) egy koncentrált oldatát NH3 cseppentővel 6) 10% - s NaOH oldattal. 7) 1% - oldatot CuSO 4 csepegtetővel, 8) 5% - oldatot ólom-acetát-cseppentő 9) ipari méretekben súlyokkal, 10) Erlenmeyer-lombikba 100 -. 150 ml (3 darab), 11) egy tölcsér , 12) állvány csövek (7 db), 13), mérőhenger, 14) nyomon követése, 15) a szűrőpapír, 16) spiritlamp, 17) a csövek szalagos, 18) illeszkednek.
A fehérjék az összes élő sejt legfontosabb összetevője. A fehérje makromolekulák molekulatömege 10 000 és több millió között van, és egy vagy több polipeptidláncból állnak, amelyek nagyszámú aminosavmaradékból vannak előállítva.
Az oldékonysági fehérjék négy csoportra oszthatók. 1) az albumin (vízben oldható) és 2) a globulin (gyenge oldatok semleges sók), 3) prolaminokat (60 - 80% - etanol prefektúra), 4) glutelinek (a gyengén lúgos oldatokban).
A fehérjék hidrofil anyagok: minden fehérjemolekula 18 000 vízmolekulát tartalmaz. A fehérjék kiszáradása (a hidratált héjak elvesztése) a koagulációhoz (csapadék) vezet.
A hüvelyesek nagyon fehérje gazdag magjai. Ennek a magnak fő tárolófehérjei a globulinok.
A munkafolyamat. 5 g borsólevelet lemértünk egy darab nyomópapírra, lombikba helyeztük és 30 ml 10% -os oldatba (NH 4) 2 SO 4-re öntöttük. Rázzuk 3 percig, és hagyjuk állni. 30 perc elteltével szűrjük át egy ugyanolyan oldattal (NH 4) 2 SO 4-vel nedvesített hullámos papírszűrőt. Először a szűrlet felhős részeit visszaverjük a szűrőre. A kapott átlátszó globulin oldatot 2-3 ml-re kell önteni egy kémcsőbe, és a következőket kell tenni:
I. A fehérje kicsapása.
1. Adja a felesleges vizet a fehérjeoldatba. Zavarosság van a fehérje vízben való oldhatatlansága miatt. Adjunk hozzá oldatot (NH4) 2SO4. A felhő eltűnik.
2. A fehérjeoldatot forraljuk fel. A csapadék hűtés után oldódik?
3. A fehérje kiszívása. Öntsük a csőbe fehérjeoldattal száraz só (NaCl), amíg a zavarosodás meg nem jelenik, majd adjunk hozzá vizet. Feltéve, hogy a csapadék oldódik-e.
4. Koncentrált HNO3-ot adunk a fehérjeoldathoz (a reakciót egy füstelszívóban végezzük), amíg a fehérje denaturálódása miatt csapadék keletkezik. A csapadék az (NH 4) 2SO 4 oldat hozzáadása után oldódik.
II. Színezett reakciók a fehérjére.
1. Xantoprotein reakció az aromás aminosavak (tirozin, fenil-alanin, triptofán) fehérjében való jelenlétére. Adjuk hozzá az erős HNO 3-at a fehérjeoldathoz, és finoman forraljuk. Mérje meg a fehérje vérrögének színét. Lehűlés után óvatosan cseppenként (a cső falánál) ammóniát adunk és jegyezzük fel az elszíneződést.
2. Biuret reakció a peptidkötéshez - CO-NH. Kétszer kisebb térfogatú NaOH-oldatot és 1-2 csepp 1% CuSO 4-oldatot adjon a fehérjeoldathoz.
3. A cisztein és a cisztin aminosavak kénjének reakciója. A fehérjetartalmú oldathoz kétszer akkora 10 térfogat% -os NaOH-oldatot adunk, és gyengéden forraljuk 2-3 percig. Ezután adjunk hozzá néhány csepp ólom-acetát oldatot, és folytassuk a fűtést, amíg egy fekete csapadék nem kerül lehelyezésre. Írja le a Na2S reakció közötti egyenletet, amely akkor keletkezik, amikor a ként a fehérjéből lúg és az ólom-acetát kiüríti. Ismertesse a reakciókat megfelelő magyarázattal.
Munka 8. A plazmolízis és a deplasmolysis jelenségei
Anyagok és berendezések: 1) izzó kék orr vagy a levelek Tradescantia, 2) 1 M szacharóz-oldatban az áramlás, 3) egy borotvát, 4) szike, 5) csipesz 6) boncolótűvel 7) mikroszkóp, 8) csúszdák és a fedél üvegből , 9) egy pohár csapvizet forralt, 10) egy üvegbottal, 11) szűrőpapírra, szellem lámpa 120, 13) illeszkednek.
A növényi sejtek lehet tekinteni, mint egy ozmotikus rendszer, amelyben a szerepe az oldat ozmotikusan aktív anyagok játszik a sejt nedv, és a szerepe a féligáteresztő membrán - tsitoplazmoticheskie membrán. A sejt-nedvet bármilyen megoldás potenciálisan m ozmotikus nyomás, amely egyenesen arányos a részecskék száma egységnyi térfogatú, függetlenül a mérete és jellege a részecskék (molekulák, ionok). Az oldatot elkülönítjük, a tiszta víz egy féligáteresztő membránnal (átereszti a vizet, és az át nem eresztő oldott anyagok) szar a víz olyan erővel, amely számszerűen egyenlő a potenciális ozmotikus nyomás, azaz. E. A nyomás, hogy kell alkalmazni, hogy megakadályozzák a víz mozgását felé oldatot. A következő oldatokat lehet választani az egyes cella: 1) egy hipotóniás ozmotikus nyomás, amely kisebb, mint az ozmotikus nyomás a sejt lé, 2) izotóniás ozmózisnyomása azonos az ozmotikus nyomás a sejt nedv, és 3) egy hipertóniás, ozmotikus nyomás, amely nagyobb, mint az a nyomás a sejt nedv
Merítve, hipertóniás oldatban sejt vizet belőle jön ki, hogy a szintező ozmotikus nyomás a sejt nedv és a külső megoldást. Ebben a cellában priterpivaet alábbi változások: Először is csökken, és miután a teljes veszteség a turgor protoplaszt mögött a sejtfal a sarkoknál (ferde plazmolízis), majd sok helyen (konkáv plazmolízis), és végül a protoplaszt lekerekített (konvex plazmalizálódnak). A protoplaszt és a sejtfal között létrejövő térközök (amelyek vízzel és oldott anyagokkal jól átjárhatók) külső oldattal töltik fel. Ahogy plazmalitikov (anyagok, oldatok okozó plazmalizálódnak) nem használják a mérgező anyag gyengén penetráló vagy nem áthatoló citoplazmából a vakuolumba. A plazmolízis reverzibilis folyamat. A plazmolízis eltűnését deplasmolízisnek hívják.
A munkafolyamat. Vágott egy borotvával egy darab epidermist, amelynek sejtjei antocianint tartalmaznak.
Az epidermisz sejtjeinek károsodásának elkerülése érdekében kívánatos, hogy a vágás 2 rétegből álljon.
Helyezze a vágást egy cseppbe, fedje le a pohár vizét egy fedőüveggel, és vizsgálja meg a sejteket a színes sejtlével mikroszkópban. Cserélje ki a vizet egy 1M-os szacharózoldattal, amelyhez nagy mennyiségű oldatot alkalmaznak a fedőlap közelében lévő diára, és egy szűrőpapírral átszívják a vizet, és ráhelyezik a fedőlap másik oldalára. Ismételje meg ezt az eljárást 2-3 alkalommal, mielőtt a vizet teljesen oldja fel. Tartsa szemmel a mikroszkópot, mi történik a sejtekben.
A sejtek vázlatos ábrázolása a turgor állapotában, szögletes, konkáv és konvex plasmolízisben, jelezve a sejtek fő alkotórészeit
Vegyen be 2-3 csepp vizet a fedőüveg alatt, kiszívva a szűrőpapír oldatot, és azonnal folytassa a sejtek deplasmolízisének megfigyelését. A deplasmolízis befejezése után meg kell ölni a sejteket, a csipesszel meg kell tartani a diét, és óvatosan fel kell melegítenie a hatóanyagot az alkohol lámpa lángján, megakadályozva a víz elpárolgását. Ezután vizet adjon az 1M-os szacharóz-oldatnak, és figyelembe véve a mikroszkóp előkészítését, annak megállapítására, hogy a plazmolízis bekövetkezik-e
Jegyezze fel a megfigyelés eredményeit, hogy válaszoljon az alábbi kérdésekre.
1. Mi a plazmolízis és mi az oka.
2. Hogyan történik a deplasmolysis?
3. Lehet plazmidizálni az elhalt sejteket?
Munka 12. A magvak életképességének meghatározása festés útján (by)
Anyagok és berendezések: 1) vízben áztatott borsómag 10-15 órával az edzés előtt, 2) indigókarmin 0,1% -os oldata (1 g 1 liter desztillált vízre), 3) porcelán csésze (2 db), 4 ) egy pohár vegyszert, 5) egy pohár fadarabot nedves fűrészporral, 6) egy tányért, 7) egy boncolótűt, 8) elektromos főzőlapot, 9) ceruzát üvegen.
A magvak festésének módszere, hogy meghatározzák csírázásukat a természetes citoplazma vízállóságára néhány festék esetében (indigocarmine, savanyú fuchsin), míg a halott citoplazma könnyen foltosodik. Vannak olyan esetek, amikor az embrió halott, és amikor a vetőmag elmerül a festékoldatba, nem folt, mivel a vetőmag környező része nem hagyja el a festéket. Ezzel összefüggésben először feltárni kell az embriót, hogy a vetőmagot a magvakkal eltávolítsák endospermussal.
Készítette a leírt eljárás a magok tartják a színezék oldatban 1 és 3 óra (attól függően, hogy a növény számára), és értékeli a életképességét a magok: a magokat színes embrióval sűrűségű vagy színezett gyökerek megtalálják nevskhozhimi magok festetlen vagy festett szikleveleket részben tulajdonítható az életképes.
Ezt a módszert alkalmazzuk gyorsan a borsó, a bab, a csillagfürt, a len, a kender, a sütőtök magjának csírázására.
A munkafolyamat. Anélkül, hogy kiválasztaná, 10 duzzadt borsó vetőmag két részéből. Tegyen egy adagot üveghez vízzel és forraljon 5 percig. Óvatosan, károsítása nélkül a sziklevél, tiszta boncolótű magjait mindkét részét a héj, hozott egy porcelán tálba, öntsük oldatot indigókármin és 1 órán át állni, majd a le-a tinta vissza a palackba, és a magokat a mosóvíz a festék feleslegét.
Jelölje meg a forrásból származó magok színét. A kísérleti részben számoljuk meg a festett, részben színezett és festetlen magok számát. A csírázás teszteléséhez dobja el a 10 magot egy pohárban nedves fűrészporral (az üveg feltöltése előtt, a felesleges vizet a fűrészporból) egy sötét szekrénybe, és naponta vizet. Néhány napon belül számold meg a csírázó mag mennyiségét. Az eredményeket táblázatban rögzítse.
Hasonlítsa össze a festési módszer és a csírázási módszer eredményeit.
Munka 13. A metilénkék akkumulációja az Elodea sejtjeiben
Anyagok és berendezések: 1) lő elodea hossza körülbelül 10 cm 2) volt mitilenovoy kék 1: 50 mg-ot 1 liter csapvíz), 3) 1 M KNO 3 oldat egy cseppentő, 4) csipesz, 5) állvány csövek (2 db ), 6) mikroszkóp, 7) objektív és borító üveg, 8) szalagpapír csíkok.
A korábbi munkákban kimutatták a citoplazma legfontosabb tulajdonságát - a féligáteresztő képességet, azaz a víz könnyen átadását és az oldott anyagok megtartását. A citoplazmának azonban nincs ideális féligáteresztő képessége, nemcsak a víz, hanem számos anyag is hiányzik, ezek közül néhány nagy sebességgel. Ezek között az anyagok közül a metilén kék, amely gyorsan behatol növényi sejtekbe. Szövetek egyes növények képesek felhalmozni nagy mennyiségű metilénkék, amíg majdnem teljes eltávolítása a külső oldat miatt kémiai kötés a festék sejtjeiben lévő tanninok, gyakran kis kék kristályok képződnek.
A munkafolyamat. Töltsön két tesztcsövet metilénkékkel. Helyezzen egy tesztcsőbe 2 3 elodódobogás, hagyja a második kontrollt. 2-3 óra elteltével (vagy minden más nap) vegye figyelembe a hajóban a szín intenzitásának változását a növényeknél a kontrollhoz képest (könnyű háttérrel szemben). Helyezzen 1-2 intenzíven színezett levelet egy csúszkába egy csepp 1 M KNO 3 oldatban, fedje le a fedőlapot, és 15-20 perc múlva nagy nagyítással vizsgálja meg mikroszkópban. Rajzoljon plazmázott sejtet.
Válaszolj a következő kérdésekre.
1. A cellának melyik része veszi fel a metilénkékot?
2. Hogyan magyarázható meg az abszorbeált festék fordított diffúziójának hiánya a sejtekből a külső megoldásban?
3. A sejtek túlélik-e a metilénkék felhalmozódása után?
Munka 11. A plasmalemma és a tonoplaszt különböző permeabilitása
Anyagok és berendezések: 1) egy közönséges izzó hagyma, 2) 1 M KNO 3 oldat csepegtető eozin, 3) mikroszkóp 4) borotvapengével 5) boncolótűvel 6) diák és borító üveglap 7) színes ceruza.
A külső citoplazmatikus membrán (plasmalemma) nagyobb áteresztőképességgel rendelkezik, mint a tonoplaszt. Ez látható a citoplazma duzzanatának megfigyelésével a benne felhalmozódó káliumionok hatására.
A munkafolyamat. Tegyen egy nagy csepp 1M KNO 3 oldatot az eozinnal, majd 2-3 darab színtelen hímes vöröshagymát és fedőlapot fedje be. 3 perc múlva megkezdjük a megfigyeléseket a plazmizált sejtek mikroszkópja alatt. Ne hagyja, hogy a gyógyszer száraz legyen, friss cseppek befecskendezésével időről időre.
Először citoplazmában körülveszi vacuole vékonyréteg, de hamarosan elkezd duzzadni (CAP plazmolízis), majd fokozatos megszűnése és eozin-festés hatása alatt áthatoló plasmalemma. Növeli-e a vacuolák mennyisége és a sejtzsír foltok.
Ismertesse a megfigyelt jelenségeket, vázolja le a sejtet a záró plazmolízis állapotában, és színezzen színes ceruzával.
A következtetésekben összehasonlítjuk a plazmalemma és a tonoplaszt permeabilitását a cseppek és az eozinionok számára, és kifejtik a citoplazma duzzadásának okait.
Munkavégzés 9. A citoplazma viszkozitásának meghatározása a plazmolízis idejének megfelelően
Anyagok és berendezések: 1) gallyakból elodea, 2) kék izzó hagyma vagy trandeskantsii levelek, és 3) 0,8 M szacharóz oldatban egy cseppentő, 4) borotvapengével 5) boncolótűvel 6) csipesz 7) mikroszkóp, 8) alany és fedőlemezeket.
A sejtek merülése pillanatától a hipertóniás oldatig a konvex plasmolízis megjelenéséig plasmolizációs időnek nevezzük. Ez az idő a citoplazma viszkozitásától függ: minél alacsonyabb a viszkozitás, annál könnyebb a citoplazma elmaradni a sejtfal mögött, és annál gyorsabb lesz a konkáv plasmolízis konvex. A citoplazma viszkozitása függ a kolloidok diszperziójának és hidratációjának mértékétől. a víztartalom a sejtben és számos más tényező. A növekvő sejtek és sejtek citoplazmája eltérő növekedést mutatott.
A kísérlet fiatal levelek elodea, amelyben lehet különböztetni négy zónára: a bázisként gyengén festett sejtosztódás zóna, jelentése a fenti zóna nyúlik, még magasabb -zone differenciálódás és végül, a felső lap, amely a sejtek, amelyek befejezték a növekedésüket, és amelynek intenzíven zöld színű.
A munkafolyamat. Mark 2-3 fiatal levelek a hajtás apikális szakasz elodea (levelek zöld kell legyen csúcsa és a halvány - zöld alap), merített egy csepp 0,8 M szacharóz-oldatban, mikroszkóp tárgylemezen és zárja a fedelet üveg. Összehasonlításképpen, egy másik csepp szacharózoldatnál helyezze a kék hagyma vagy a Tradescantia epidermiszét. Jelölje meg a vizsgált tárgyak merítésének idejét a megoldásban. A preparátumokat 5 percenként mikroszkópban figyelembe véve határozza meg a plazmolízis idejét, és az Elodite levélben vegye figyelembe a különböző zónák sejtjeit. Jegyezzük fel az eredményeket, és arra a következtetésre jutunk, hogy a citoplazma viszkozitása a sejt korától függ.