Laboratóriumi munka №1 szín reakciókat fehérjék
Színreakciók fehérjéket
A proteinek jelenlétét biológiai oldatok, vagy lehet meghatározni színreakció, amely áramlási jelenléte miatt a specifikus fehérje csoportok és peptid kötések.
Reagensek: vizes tojásalbumin (fehérje csirke tojássárgája elválasztjuk oldjuk 15-20-szeres térfogatú desztillált vízzel, majd az oldatot szűrjük át gézen, hajtogatott 3-4 rétegben, és hűtőben tároljuk, a 10%-hidroxid-oldattal nátrium, 30% nátrium-hidroxid oldattal, 1 tömeg% -os réz-szulfát-oldattal, 1% ólom-acetát-oldattal, tömény salétromsav, 0,5% ninhidrin-oldattal th.
Felszerelés: kémcsövek; vízfürdő vagy szeszes lámpát.
Feladat 1. biuret reakció.
Lúgos környezetben fehérjék és azok hidrolízis termékek - a peptidek így bíborszínű vagy vörös-lila színű réz-sók. Reakció jelenléte miatt a proteinekben a peptidkötéseket:
A szín intenzitása függ a polipeptid hosszának.
- A pour cső 5 csepp tojás fehérje oldattal, majd 10 csepp 10% -os lúgoldatot.
- Add 1-2 csepp a réz-szulfát-oldatot, majd az elegyet. Úgy tűnik, a vörös-ibolya színű.
Feladat 2. ksantoproteinovaya reakciót.
A reakciót jellemző néhány aromás aminosavak (fenil-alanin, tirozin, triptofán), valamint a peptidek ezeket tartalmazó. Amikor az intézkedés a salétromsav képződik nitrovegyületet sárga szín. További nitro-származékok képesek reagálni lúggal nátrium só, amelyben a sárga-narancssárga színű:
Ezt a munkát kell végezni Elszívófülke megfigyelése rendkívül óvatosan!
- A pour cső 5 csepp oldatot tojásfehérje és a fal VIGYÁZAT hozzá 3-4 csepp tömény salétromsavat.
- A keveréket óvatosan hőt. Csapódik ki, amely sárgára vált.
- Hűtés után egy cső fala VIGYÁZAT dagály 10 csepp 30% -os nátrium-hidroxid-oldattal, a sárga szín válik narancssárga.
Feladat 3. Reakció a kéntartalmú aminosavak (Rea CIÓ Nogier).
A maradék kén-tartalmú aminosavak cisztein és cisztin kén hasítása lúgos hidrolízissel alkotnak szulfidok. Szulfidok kölcsönhatásban ólom-acetát, hogy csapadék képződjék ólom-szulfid fekete vagy barna-fekete színű.
- In vitro mix 5 csepp tojás fehérje oldat, 5 csepp 30% -os nátrium-oldatot és 2 csepp ólom-acetát-oldat.
- A keveréket óvatosan egy szeszes forrásig melegítjük és lassú tűzön. Egy idő után, van egy barnás-fekete vagy fekete színű.
A reakciót jellemző aminocsoport α-helyzetben, és annak köszönhető, hogy a jelenléte α-aminosav a fehérjemolekula. Amikor a fehérje melegítjük vizes Ninhidrin aminosavak oxidálódnak és lebomlanak, hogy szén-dioxid, ammónia és a megfelelő aldehidet. Újrahasznosított ammóniát kondenzálunk ninhidrinnel és ninhidrinnel molekula oxidáljuk vegyületet lila-kék:
Abban, hogy a cső 5 csepp 1% tojásfehérje oldathoz 3 csepp 0,5% -os ninhidrin oldat és forrásig melegítjük. 2-3 perc után, van egy rózsaszín, piros, majd kék-lila színű.
Alkalmazni tanulmányok a táblázat formájában.