Lejárat dátuma
Ha antitesteket tárolnak nullára, akkor fontos, hogy ne használjon jégmentes hűtőszekrényeket. A hagyományos háztartási hűtőszekrények fagymentesek, és többször is szabadon felengedő cikluson mennek keresztül a fagy kialakulásának megelőzése érdekében.
A konjugált antitesteket sötét színű fiolákban vagy alumínium fóliával bevont ampullákban kell tárolni.
A kémiai módosítások, mint például a fehérjék oxidációja és proteolitikus lebomlása mérsékelt hőmérsékleten fordulnak elő, de ezeknek a reakcióknak a mértéke sokkal erősebb a magas hőmérsékleten. Az antitesteket általában tiszta és steril üvegtartályokban vagy polipropilén palackokban ≤ 4 ° C-on tárolják. A szobahőmérsékleten történő tárolás gyakran az ellenanyag lebomlását és / vagy inaktiválódását eredményezi, rendszerint a mikroorganizmusok növekedése miatt. Rövid eltarthatósági időtartam (1 naptól több hétig) az ellenanyagoldatokat 4 ° C-on tárolhatjuk jelentős aktivitáscsökkenés nélkül.
Cryoprotectors: glicerin és etilénglikol
A jégkristályok kialakulása elpusztíthatja a fehérje szerkezetét, és így az ellenanyag hatékonyságának csökkenését okozhatja. Krioprotektánsok, mint a glicerin és etilénglikol, megakadályozhatja, hogy a hidrogén kötések kialakulását vízmolekulák közötti, és ezáltal csökkenti befagyasztása hozzátéve, hogy a vizes oldat. A tényleges fagyási hőmérséklet függ a krioprotektánsok összetételétől / koncentrációjától, lásd a 2. táblázatot.
2. táblázat: Glicerin és etilénglikol fagypontjai (Celsius fokokban) különböző koncentrációban (%%) a vízben.
Megjegyzés: Az etilén-glikol mérgező, és óvatosan kell használni.
Ha a tárolási hőmérséklet a krioprotektánsokkal szembeni antitestek oldatának fagyáspontja alatt van, akkor az oldat megszilárdul. Azonban a jégkristályok kialakítása helyett vitrifikáció léphet fel, mint például a sejtek / embriók DMSO-val történő krioprezervációja esetén. A vitrifikáció vitrifikációja során az antitestek szerkezeti integritását megőrzik.
A stabilitás fokozásához 50% végső koncentrációban glicerint vagy etilénglikolt adunk hozzá, és az ellenanyagot -20 ° C-on tároljuk. Az ellenanyag oldatot kis térfogatban kell tárolni, hogy elkerülje az ismételt fagyás-felengedési ciklusokat.
Fontos steril glicerint használni, mivel a glicerin mikrobákkal szennyezett lehet.
1. ábra Nátrium-azid különböző koncentrációkban gátolja a Gram-negatív baktériumok növekedését. [2] -tól.
Sterilizáció és antimikrobiális vegyületek
Antitest készítményeket mindig segítségével végzett szűréssel sterilizáltuk 0,45 mikronos szűrőn, és kell kezelni aszeptikus körülmények mikrobiológiai szennyeződésének megelőzésére.
Az antimikrobiális szerek, mint a nátrium-azid (NaN3) 0,02-0,05% (w / v) végkoncentrációban vagy thimerosal 0,01% (tömeg / térfogat) végkoncentrációban gátolják a mikrobiális növekedést.
A nátrium-azid (NaN3) mérgező a legtöbb sejtre és szervezetre, beleértve az embereket is (lásd 1. ábra) [1]. Azonban Gram-pozitív baktériumok (streptococcusok, pneumococcusok, lactobacillusok) ellenáll a nátrium-azidot, lásd. 2. ábra) [2] [3] [4]. A nátrium-azid gátolja a citokróm-oxidáz a mitokondriális elektron transzport lánc és jelentése például, apoptózist RGC-5 sejtek [5]. Az nátrium-azid oldatban lévő antitesteket nem szabad közvetlenül élő sejtekben vagy in vivo vizsgálatokban alkalmazni. Ezenkívül a nátrium-azid megakadályozza a kapcsolási reakciók nagy részét. A nátrium-azidot gélszűréssel vagy dialízissel távolíthatjuk el.
Megjegyzés: a nátrium-azidot az idősebb generációs autók biztonsági párnáiban használják.
2. ábra A nátrium-azid nem képes gátolni a Gram-pozitív baktériumok növekedését. [2] -tól.
A proteáz inhibitorok megakadályozzák a fehérjék proteolitikus hasítását. Az antitestek proteolízisének fontos kérdése lehet az aszcitikus folyadék és a szérumkészítmények tárolásának, hiszen mind az ascitesek, mind a szérumkészítmények tartalmaznak proteázokat. Hideg tárolás és / vagy proteázgátlók alkalmazhatók a lebomlás megszüntetésére.
Antitestek oldatokban (1 mg / ml) a tárolás során.
A hordozó fehérje vagy fehérje töltőanyagok, mint például a tisztított marha szérum albumin (BSA) vagy zselatin, adhatunk hígítsuk az antitest végső protein koncentráció 1-5 mg / ml (0,1-0,5%).
Szárazjég tárolás és szállítás közben
A legújabb kutatások azt mutatják, hogy száraz jég tárolás és szállítás során a fehérje okozhat savanyítás oldat tárolási, és fog okozni aggregációját fehérjék (a csapadék képződése mellett), különösen atsidnymi proteinek (fehérjék izoelektromos kevesebb, mint 7) [6]. A poliklonális IgG savas, pI értéke 4,7-7,5 [7]. A lezárt fiola, a gáz és / vagy gáz lezárt műanyag zacskók (csomagolásra palack) kell használni, hogy a károk minimalizálása mellett a újra egyensúlyba hoztuk minták -80 ° C-on a fagyasztóba néhány napig. Csomagok Dri-Shield nedvességzáró táskák 3M termékek Thermo Scientific ™ Nunc ™ Cryoflex és IMPAK csomagokat, mint 0203PM56OZETN és 05MP081OZE, hasznos lehet.
Az antitestmolekulák oxidációjának hatását alaposan tanulmányozták, különösen a terápiás antitestek esetében. Az antitestlánc szerkezetében lévő metionin-maradékok általában a fő oxidációs hely, amikor az antitestek intenzív fénynek és / vagy emelt hőmérsékletnek vannak kitéve [8]. Az antitestek mind intra-, mind láncközi diszulfid-kötéseket tartalmaznak. A leggyakrabban alkalmazott antioxidánsok, mint a 2-ME és a DTT, nem képesek megakadályozni a diszulfid átrendeződését [9]. míg egy másik antioxidáns - metionin nem elősegíti a diszulfidcsoportok átrendeződését, és lehet a legjobb antioxidáns antitestek tárolására [All Fitchmun, Somatek, San Diego, Kalifornia, USA].
A tevékenység szinte nem elvész, ha a szérumot közvetlenül tárolják tíz évig -20 ° C-on. Azonban az antitestek tisztítása után évek óta némi aktivitáscsökkenés tapasztalható, bár nagyon lassan. Úgy tűnik, hogy a glicerin nem szükséges tárolás -20 ° C-on év, vagy akár évtizedek, ha az antitestek nincsenek kitéve ismételt ciklus fagyasztás / felolvasztás. Az antitesteket magas koncentrációban kell tárolni.
A monoklonális antitestek -20 ° C-on 50% -os glicerinben tárolhatók. Azt is leírták, hogy a monoklonális antitestek tárolható alatt telített ammónium-szulfát formájában gyöngyök 4 ° C-on vagy -20 ° C-on évig az aktivitás elvesztése nélkül, vagy a baktériumok növekedését okisleniya.Liofilizatsiya (szárítást vagy fagyasztva szárítást a fagyasztott állapotban) egy alternatív a fagyasztásnak ellenálló antitestek stabilizálására szolgáló eljárás. A legtöbb esetben a liofilizált fehérjék -20 ° C-on tárolhatók. A liofilizáláshoz drága eszközök szükségesek és munkaigényesek.
Az antitesteket sötétben vagy alumíniumfóliával ellátott tartályokban kell tárolni.
Alkalikus foszfatázzal konjugált enzimek és más különösen érzékeny a fagyasztás, és ezek általában kell tárolni 4 ° C-konjugáció után a rövid srok.Konyugaty antitesteket legjobb tárolni hosszú időn át -20 ° C-on és glicerin vagy etilénglikol végső koncentráció 50 %. Míg egyes enzimek konjugátumok tárolható -20 ° C-on, anélkül krioprotektáns, fagyasztott mintákat úgy kell megtervezni egy egyszeri használatra, hogy megakadályozzák ismételt fagyasztás-felengedés ciklusok.
Fluoreszcein konjugált antitestek
A fluoreszcencia fény hatására csökkenhet. Mint bármely, fluoreszcens címkével (és nem csak antitestekkel) konjugált reagens, az ellenanyag konjugátumokat védeni kell a fénytől. A fluoroforral konjugált antitesteket 4 ° C-on kell tárolni, soha nem fagyasztva.
Lichstein H, Soule M. Tanulmányok a hatása nátrium-azid a mikrobiális növekedési és légzési: I. A Action nátrium-azid a mikrobiális növekedés. J Bacteriol. 1944; 47: 221-30 PMID 16560767
Lichstein H, Soule M. A nátrium-azid mikrobikus növekedésre és légzésre gyakorolt hatásának vizsgálata: II. A nátrium-azid hatása a bakteriális katalázra. J Bacteriol. 1944; 47: 231-8 PMID 16560768
Lichstein H. A nátrium-azid mikrobikus növekedésre és légzésre gyakorolt hatásának vizsgálata: III. A nátrium-azid hatása a B. subtilis és a P. aeruginosa gáztartalmára, valamint a pirocianin hatása a P. aerugino pyocyanin-mentes törzsének gázcseréjére. J Bacteriol. 1944; 47: 239-51 PMID 16560769